Repository of Research and Investigative Information

Repository of Research and Investigative Information

Rafsanjan University of Medical Sciences

تهیه، تخلیص و شناسایی اجزاء آنتی ژن های دفعی – ترشحی تاکی زوئیت‌های توکسوپلاسماگوندی سویه RH

(2003) تهیه، تخلیص و شناسایی اجزاء آنتی ژن های دفعی – ترشحی تاکی زوئیت‌های توکسوپلاسماگوندی سویه RH. Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences. pp. 1-9. ISSN 1735-3165

[img] Text
article-1-56-en.pdf

Download (357kB)

Official URL: http://journal.rums.ac.ir/article-1-56-en.html

Persian Abstract

خلاصهسابقه و هدف: مطالعات قبلی نشان داده است که آنتی ژن‌های دفعی – ترشحی (E/SA) تاکی زوئیت‌های توکسوپلاسما گوندی می‌توانند نقش مهمی دربیماری‌زایی,‌ مصونیت میزبان در برابر آلودگی مجدد به انگل, تشخیص و افتراق مرحله حاد از مزمن توکسوپلاسموز داشته باشند. برای بررسی دقیق تر موارد فوق نیاز به اجزاء تخلیص شده این آنتی ژن‌ها می باشد. بنابراین هدف مطالعه حاضر تهیه,‌ تخلیص و شناسایی اجزاء تشکیل دهنده این آنتی ژ‌ن‌ها و تعیین روش مناسب برای این منظور بود.مواد و روش‌ها:  108×2 تاکی زوئیت توکسوپلاسما گوندی در دو میلی لیترمحیط کشت RPMI-1640 (در لوله های درب پیچ دار) سوسپانسیون و به مدت یک ساعت در 37 درجه سانتیگراد تحت تکان ملایم قرار گرفتند، سپس محتوای هر لوله سانتریفوژ ( 15 دقیقه در g1000 ) و مایع رویی به عنوان محلول حاوی E/SA دیالیز و تغلیظ گردید. در مرحله بعد این محلول به طریق کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون با ستون ژل سفادکس G-200 به ابعاد 5/2×40 سانتیمتر و خروجی 15 میلی لیتر در ساعت و کروماتوگرافی مبادله یون با ستونی به ابعاد 1×15 سانتیمتر از ژل کربوکسی متیل با خروجی 60 میلی لیتر در ساعت تحت شیب خطی pH تفکیک گردید. بعد از آن اجزاء حاصل به روش Native- PAGE الکتروفورز شدند. یافته‌ها:‌ E/SA در ژل فیلتراسیون به سه جزء‌تفکیک شد، اما از کروماتوگرافی مبادله یونی آن دو پیک حاصل شد که پیک دوم در الکتروفورز Native- PAGE به یک باند تجزیه گردید. نتیجه‌گیری: نتایج نشان می‌دهد که کروماتوگرافی مبادله یون با شرایط این مطالعه روشی مناسب برای تفکیک E/SA (تهیه شده به روش پیشنهادی) تاکی زوئیت‌های توکسوپلاسماگوندی می باشد، زیرا بدون تغییر ساختار مولکولی پروتئین, اجزائی با درجه خلوص بالا و به میزان نسبتاً زیادی حاصل می‌شود.  واژه‌های کلیدی: توکسوپلاسماگوندی, کروماتوگرافی تعویض یون, ‌آنتی ژن‌های دفعی – ترشحی, الکتروفورز

Title

Preparation, Purification and Identification of Excreted/Secreted Antigens of Toxoplasma Gondii Tachyzoites

Abstract

Preparation, Purification and Identification of Excreted/Secreted Antigens of Toxoplasma Gondii Tachyzoites    S.H. Abdollahi1 *   1- Assistant Professor, Department of Microbiology, Rafsanjan University of Medical Sciences, Rafsanjan, Iran    Background: The Excreted/Secreted antigens (E/SA) of toxoplasma gondii tachyzoites are thought to play an important role in the pathogenesis of parasite and the hosts, immunity against infection with this Parasite . These antigens are also useful for diagnosis and differentiation of acute from chronic phase of toxoplasmosis . Therefore the aim of the present study was to detect the best technique for preparation, purification and identification of these antigens.   Materials and Methods: Tachyzoites (2×108) were incubated at 37°C for 1hour under mild agitation in test–tubes containing 2ml of RPMI-1640 culture medium without FCS. After centrifugation for 15min at 1000g the E/SA containing supernatant were dialyzed and concentrated. E/SA were separated by gel filtration and ion exchange chromatography.   Fractions of both chromatography columns were analyzed by Native–PAGE electropho_ resis.   Results: E/SA were eluted in three and two Peaks by gel filtration and ion-exchange chromatography respectively. The second peak obtained from ion-exchange chromatograp_ hy produced one band in native – PAGE.   Conclusion: The result of this experiment showed that ion-exchange chromatography under this conditions is a good tool for purification of E/SA .     Keywords: Toxoplasma Gondii, Excreted/Secreted Antigens, Ion-exchange Choromatography, Electrophoresis     * Corresponding author tel: (391) 5234003-5 Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences and Health Services, 2002, 2(1): 1-9

Item Type: Article
Keywords: Toxoplasma Gondii, Excreted/Secreted Antigens, Ion-exchange Choromatography, Electrophoresis
Divisions: Research Vice-Chancellor Department > Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences
Page Range: pp. 1-9
Journal or Publication Title: Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences
Journal Index: ISC
Volume: 2
Number: 1
Publisher: Journal of Rafsanjan University of Medical Sciences
ISSN: 1735-3165
Depositing User: آقای علی علوی
URI: http://eprints.rums.ac.ir/id/eprint/6288

Actions (login required)

View Item View Item